Хламидер

Лиофилизат для диагностических целей. В комплекте 3 амп. по 1 мл с диагностикумом хламидийным сухим; 3 амп. по 1 мл с диагностикумом контрольным сухим; 2 амп. по 0,1 мл с хламидийной сывороткой сухой, ножом ампульным в пачке из картона.

Лиофилизат: пористая масса коричневого цвета, допускается наличие беловатого кольца (слоя) на поверхности.

Диагностикум эритроцитарный хламидийный сухой для РНГА.

Выпускают в комплекте с диагностикумом эритроцитарным контрольным и хламидийной сывороткой. Один комплект рассчитан на исследование 36 сывороток, включая контрольный образец.

Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) проводят микрометодом в полистироловых пластинах с U-образными лунками микротитратора Такачи (Венгрия) или в полистироловых планшетах для иммунологических реакций одноразового использования.

Предупреждение. Препарат Хламидэр^® является биологически безопасным, т.к. содержит неинфекционный антиген и инактивированную контрольную сыворотку.

Вместе с тем, со всеми тестируемыми образцами, сточными растворами, а также с оборудованием и материалами, находящимися с ними в контакте, следует обращаться как с инфекционным материалом:

- работать в резиновых перчатках, не пипетировать растворы ртом;

- пипетки, посуду и прочее оборудование, соприкасающееся с кровью, обязательно обрабатывать дезинфицирующими растворами (замачивать 5% раствором хлорамина на 24 ч).

Приготовление реагентов и растворов. Для проведения реакции содержимое ампулы с хламидийным или контрольным диагностикумом растворяют в 1 мл очищенной (дистиллированной) воды. Время растворения не должно превышать 1 мин при температуре (20±2) °C до образования при встряхивании равномерной взвеси коричневого цвета. После растворения до начала использования диагностикумы выдерживают в течение 1 ч при температуре (20±2) °C. Жидкий препарат годен для употребления в течение 9 ч. Перед использованием диагностикум тщательно взмучивают пипетированием.

Хламидийную сыворотку, прилагаемую к диагностикуму эритроцитарному хламидийному в качестве положительного контрольного образца, растворяют в 2 мл формалинизированного физиологического раствора (ФФР)¹ рН 7,2–7,4, получая разведение сыворотки 1:20.

Проведение РНГА. Последовательные разведения исследуемых сывороток готовят на ФФР рН 7,2–7,4. Для этого в ряд лунок капельницей микротитратора Такачи (2 капли) или микропипеткой вместимостью 0,1 или 0,2 мл наливают по 0,05 мл ФФР. В первую лунку вносят 0,05 мл исследуемой сыворотки, предварительно разведенной 1:20, после перемешивания пипеткой переносят 0,05 мл во вторую лунку, из второй — в третью и т.д. Из последней лунки 0,05 мл конечного разведения исследуемой сыворотки выливают. Затем в каждую лунку вливают по 0,01 мл диагностикума эритроцитарного хламидийного. Содержимое лунок тщательно перемешивают постукиванием по краям пластины и оставляют при температуре (20±2) °C.

Реакцию сопровождают следующие контроли.

1. Контроль диагностикума эритроцитарного хламидийного на отсутствие спонтанной агглютинации: в три лунки, содержащие по 0,05 мл ФФР, добавляют по 0,01 мл хламидийного диагностикума.

2. Положительный контроль: проведение РНГА с хламидийной сывороткой, прилагаемой к препарату. Готовят последовательные разведения этой сыворотки в объеме 0,05 мл от 1:40 до разведения, в два раза превышающего титр данной сыворотки, который указан на этикетке. После этого в каждую лунку вносят по 0,01 мл хламидийного диагностикума.

3. Контроль на специфичность взаимодействия исследуемой сыворотки с диагностикумом эритроцитарным хламидийным (исключение реакций, обусловленных антителами к яичному компоненту) — проведение РНГА с диагностикумом эритроцитарным контрольным. Готовят последовательные разведения исследуемой сыворотки, аналогичные разведениям опытного ряда, и в каждую лунку добавляют по 0,01 мл диагностикума контрольного.

4. Контроль диагностикума эритроцитарного контрольного на отсутствие спонтанной агглютинации: в три лунки, содержащие по 0,05 мл ФФР, добавляют по 0,01 мл контрольного диагностикума.

При проведении контролей все условия должны быть равнозначны условиям проведения основного опыта.

Учет результатов. Результаты учитывают через 4 ч после завершения проведения реакции.

Учет результатов проводят визуально по степени агглютинации эритроцитов, по четырехкрестной системе:

++++ — агглютинировавшие эритроциты ровным слоем выстилают дно лунки, образуя по форме купол;

+++ — на фоне равномерно агглютинировавших эритроцитов отмечается широкое кольцо с тонким неровным «фестончатым» краем, представляющее собой неагглютинировавшие эритроциты;

++ — на фоне равномерно агглютинировавших эритроцитов отмечается менее широкое кольцо с более ровными краями, представляющее собой осадок неагглютинировавших эритроцитов;

+ — значительная часть эритроцитов не агглютинируется и оседает на дно лунки в виде кольца с четким краем, вместе с тем имеется небольшое количество агглютинировавших эритроцитов;

− — эритроциты оседают в центре лунки в виде диска или компактного кольца с четким краем, хлопья агглютинировавших эритроцитов отсутствуют.

Реакция считается положительной при выраженности агглютинации не менее, чем на +++.

Реакцию считают специфической в том случае, если:

1. Контроли 1, 3, 4 отрицательные. Если исследуемая сыворотка реагирует с контрольным диагностикумом в таком же разведении, что и с диагностикумом эритроцитарным хламидийным, то реакция расценивается как неспецифическая.

2. Диагностикум эритроцитарный хламидийный агглютинируется хламидийной сывороткой до ее титра, указанного на этикетке ампулы.

За титр исследуемой сыворотки принимают ее наибольшее разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитарного диагностикума не менее чем на +++.

Диагностическим титром при однократном исследовании считают разведение 1:80 и выше.

Возможны перекрестные положительные реакции в низких титрах с сыворотками, иммунными к риккетсиям Провачека.

¹ Готовят по следующей прописи: хлорид натрия по ГОСТ 4233-77 — 8,5 г; формалин по ГОСТ 1625-75 — 3 мл; вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 — до 1 л. рН должен быть от 7,2 до 7,4. Коррекцию проводят раствором гидроокиси натрия или соляной кислотой в концентрации 0,01 моль/л.